Гост 52815-07

У нас вы можете скачать гост 52815-07 в fb2, txt, PDF, EPUB, doc, rtf, jar, djvu, lrf!

Если при последующем подтверждении принадпожности коэгулазоположительных стафилококков к 5. При испытании высококисротных продуктов для предотвращения резкого снижения рН на 0. Количество добавляемого раствора гидроокиси натрия ипо величину. Долускается доводить рН до ноитрального значения с помощью стерильного раствора гидроокиси натрия в самом высококислпотном продукте.

Содержание хлористого натрия МаС] в посевах ие должно быть более 6. Байрд-Паркер агара с кроличьеи ппазмой и бычьим фибриногеном, молочио-солового агара, яично-желточно-азидного агара или яично-желточно-сопевого агара см. Пересовы проводят также из пробирок, в которых нет видимых признаков роста. Если на поверхность Жиолитти-Кантони бульона наслаивали голодный агар или парафин, то перед пересовом с соблюдением правил асепгики их удаляют, используя для этого стерильный шпатель.

Шпатс- лем режут слой агара на четыре части вдоль и. На Байрд-Паркер arape после инкубирования в течение 24 ч коагулазопопожительные стафипококки образуют типичные колонии черного или серого цвета блестящие и выпуклые. После инкубирования в течение 24 ч непосредственно около колонии в прозрачной зоне может появиться опапес- цирующее кольцо.

На Баирд-Паркер агаре с кроличьейя плазмой и бычьим фибриногеном коагулазоположительные стафилококки образуют черныев или серые, или ровные белые мелкие колонии. На молочно-сопевом агаре колонии ковгупазопопожительных стафипококков круглые. Атипичные колонии на Байрд-Паркер агаре могут представлять одну из следующих морфопогии:.

Для подтверждения принадлежности отобранных типичных и атипичных колоний к хоагулазоположительным стафилококкам пересевают каждую отобранную колонию отдельно в жидкую среду. Готовят такое чиспо разведений. Осторожно перемешивают инокулят со средом. Подготовка Жиолитты-Кантони бульона к посеву, создание анаэробных условий для роста микроорганизмов — по 8. Переносяг с помощью стерильной пипетки 0,1 —0.

Байрд-Паркер агар с кроличьей плазмой и бычьим фибриногеном используют дпя посева сильно обсемененных продуктов. Для посева продукта или каждого его разведения используют две параллельные чашки Петри со средой. Если необходимо, повторяют процедуру для исходного разведения. Для посева в качество арбитражнои среды используют Баирд-Паркор агар. По 1 см1 высевают на поверхность среды в одной большой чашке Петри диаметром мм либо на поверхность среды в трех маленьких чашках Потри диаметром 90 мм.

В обоих случаях высевают параллельные навески. Примерно в течение 15 мин дают подсохнуть поверхности среды под крышками по ГОСТ Характеристика типичных и атипичных копонии — по 8. Для подсчета берут чашки Петри, на которых выросло максимум колонии. В посевах на чашках Петри не должно быть менее 15 колоний. Выбирают для подтверждения на каждой чашке Петри пять типичных копонии. Если на чаш- ках Петри. Отбирают копонии для подтверждения в количествах.

В две другие стерильные чашки Петри вносят по 1 см: Повторяют эту процедуру для последующих разведений. Посевы заливают Байрд-Паркер агаром с кроличьей плазмой и бычьим фибриноганом или одной из агарбизованных сред.

Осторожно перемешивают инокупят со средой и для застывания оставляют чашки Петри в спокойном состоянии на холодной горизонтальной поверхности. Если нообходимо, продолжают инкубирование еще 18—24 ч. Для подтверждения принадлежности выросших типичных и или атипичных колоний к коагулазоположительным стафилокожкам отбирают колонии в соответствии с 8.

При выявлении коагупазоположительных стафилококков посевом в или на агаризованную среду лодсчота количества колоний не проводят. Для подтверждения приналлежности к коагулазоположительным стафипококкам у выросших микроорганизмов и отобранных по 8. Из культур гопювят мазки. Коагупазоположительные стафилококки положительно окрашиваются по Граму.

Способность выросших микроорганизмов образовьзать каталазу определяют по ГОСТ Коагупазоположительные стафилококки образуют каталазу. Тест на коагулазу считают попожительным, еспи культура показала. Для контроля качества каждой партии плазмы добавляют 0. Рисунок 1 —- Результаты козгулазного теста. Если и через 24 ч плазма не скоагулировала. Оценка степени коагупирования плазмы — по 9. При постановке реакции плазмокоагуляции к 0. Учет результатов коагуляции плазмы в данном спучав проводят в сроки от 30 мин до 2—4 ч.

Оценка степени коагулирования плазмы — по 9. Еспи при испытании типичных и атипичных колоний в них обнаружены грамположительные кокки. Диффоренициация коагупазоположитольных видов и подвидов стафилококков по двум признахам — образованию и ферментации марьтозы в аэробных условиях приведена в приложении А. Культуру высевают в пробирки со средои Кларка. После инкубирования посевов к 1 см" отобраннои хультуральнои жидкости прибавляю!

После прибавления каждого реактива пробирку встряхивают. Появление розового окрашивания через 15 мин указывает на положительную рвакцию. Для определения ферментации мальтозь, в азробных условиях культуры.

При фермонтации мальтозы в аэробных условиях с образованием кислоты цвет среды Гисса изменяется. Засеянные чашки Петри помещают? При наричии термостабильной нуклеазы появляется ярко-розовая зома вокруг колодца на синем фоне среды. Культуру высевают на кровяного дгара. После инкубирования посевов чашки Петри просматриваюл? Наличие термостабильной нукледзы и гемолитической активности подтверждает энторотоксигенные своиства 5.

Число коагулазоположительных стафилококков для каждой чашки Петри а. В, — число типичных колоний. При посеве в Байрд-Паркер агар с кроличьеи плазмой и бычьим фибриногеном подтверждения принадлежности к коагулазоположительным стафилококкам не проводят. В этом случае коагулазоположитель- ными стафилококхами на чашке Петри считают все типичные колонии. Рассчитанные значения а используют для подсчета количества коагулазоположительных стафипококков или 5.

Химические вещества, используемые для приготовления питательных сред, растворов реактивов, эмульсий, должны быть аналитического качества. Разливают среду по см в колбы или флаконы соответствующей вместимости. Примечание - Необходимо предварительно убедиться, что имеющийся в наличии теллурит калия пригоден для данного испытания.

Твердое вещество должно легко растворяться. Если в воде присутствует белый нерастворимый осадок, то такой порошок не используют. Стерилизуют приготовленный раствор теллурита калия путем фильтрации через мембранный фильтр с размером пор 0,22 мкм. Если при хранении раствора образуется белый осадок, то такой раствор не используют.

С соблюдением правил асептики разбивают скорлупу яйца и отделяют желток от белка, поочередно перенося желток из одной половинки скорлупы в другую. Желтки помещают в стерильную колбу и добавляют 4-кратное количество по объему стерильной воды. Для использования собирают в асептических условиях в стерильную колбу надосадочную жидкость.

Допускается использование готовой эмульсии промышленного производства, в этом случае эмульсию применяют в соответствии с инструкцией изготовителя. Допускается проводить приготовление желточной эмульсии по ГОСТ Доводят объем водой до см. Стерилизуют путем фильтрации через мембранный фильтр с размером пор 0,22 мкм. В асептических условиях добавляют два других раствора и, если необходимо, раствор сульфаметазина см. Предпочтительней подсушивать среду при снятых крышках и поверхностью среды вниз.

Разливают питательную среду по см в пробирки. Разведенную плазму по 0,5 см разливают в стерильные пробирки. В плазму, содержащую оксалат или гепарин ЭДТА, не добавляется. Для приготовления агара с кроличьей плазмой и бычьим фибриногеном к плазме добавляют трипсин из расчета 30 мг трипсина на 30 см плазмы. Плазму готовят непосредственно перед применением.

Если используется готовая обезвоженная плазма, то восстановление и использование такой плазмы проводят в соответствии с прилагаемой к ней инструкцией. Плазма готовится непосредственно перед применением. Качество плазмы тестируется с помощью коагулазоположительных и коагулазоотрицательных штаммов стафилококков.

Особенно надо обращать внимание на температуру основы среды. При несоблюдении температуры среда может потерять свою активность. Тщательно перемешивают среду вращением после каждого прибавления, минимизируя вспенивание. Используют готовую среду непосредственно после приготовления, тем самым избегая преципитации плазмы.

Разливают среду в соответствующем количестве в пробирки соответствующего объема - 16x мм для среды нормальной концентрации и 20x мм - для среды двойной концентрации. Наливают в пробирки соответствующего объема. К раствору добавляют ДНК, хлористый натрий, раствор хлористого кальция, агар нагревают до полного расплавления агара. Раствор доводят водой до метки.

Агар с кровью тщательно перемешивают, избегая вспенивания, и разливают по чашкам. В результате встряхивания находящийся в крови фибрин выпадает в осадок, обволакивая бусы, а дефибринированная кровь, слитая в другую колбу, утрачивает способность свертываться. Допускается применять одноразовую посуду, если она отвечает соответствующим требованиям. Важно, чтобы для испытания поступила представительная проба продукта, не поврежденная и не измененная в ходе транспортирования или хранения.

В 10 см модифицированного Жиолитти-Кантони бульона нормальной концентрации или сред см. Оставляют минимум воздушного пространства в пробирке или флаконе. После посева навески продукта и или его разведений на поверхность Жиолитти-Кантони бульона осторожно наслаивают слой стерильного голодного агара или слой стерильного парафина, приготовленных по ГОСТ Соотношение между количеством высеваемого продукта или его разведением и питательной средой нормальной концентрации 1: При использовании среды двойной концентрации соотношение между количеством высеваемого продукта или его разведением и питательной средой 1: Если при последующем подтверждении принадлежности коагулазоположительных стафилококков к S.

При испытании высококислотных продуктов для предотвращения резкого снижения рН на 0,5 и более питательных сред рН питательных сред после внесения в них продукта или его разведений доводят до допустимых значений с помощью стерильного раствора гидроокиси натрия, приготовленного по ГОСТ Количество добавляемого раствора гидроокиси натрия или величину, на которую необходимо увеличить рН при приготовлении питательных сред, устанавливают опытным путем.

Допускается доводить рН до нейтрального значения с помощью стерильного раствора гидроокиси натрия в самом высококислотном продукте. При анализе пищевых продуктов с большим содержанием хлористого натрия NaCl посев исследуемого продукта или его исходного разведения в солевой бульон не проводят.

Если появилось почернение или черный осадок в Жиолитти-Кантони бульоне или помутнение в солевом или сахарном бульоне, то проводят подтверждение принадлежности выросших микроорганизмов к коагулазоположительным стафилококкам.

Байрд-Паркер агара, Байрд-Паркер агара с кроличьей плазмой и бычьим фибриногеном, молочно-солевого агара, яично-желточно-азидного агара или яично-желточно-солевого агара см. Пересевы проводят также из пробирок, в которых нет видимых признаков роста.

Если на поверхность Жиолитти-Кантони бульона наслаивали голодный агар или парафин, то перед пересевом с соблюдением правил асептики их удаляют, используя для этого стерильный шпатель. Шпателем режут слой агара на четыре части вдоль и, если необходимо, вставляют шпатель в пробирку и проводят по окружности агара для освобождения его от стекла пробирки.

Взбалтывают пробирку, вызывая разбивание слоя и выпадения его на дно пробирки для обеспечения ровной поверхности культуральной суспензии. На Байрд-Паркер агаре после инкубирования в течение 24 ч коагулазоположительные стафилококки образуют типичные колонии черного или серого цвета блестящие и выпуклые, окруженные прозрачной зоной, диаметр колоний около 1,,5 мм и до 1,,5 мм после инкубирования в течение 48 ч.

После инкубирования в течение 24 ч непосредственно около колонии в прозрачной зоне может появиться опалесцирующее кольцо, окружающее колонию. На Байрд-Паркер агаре с кроличьей плазмой и бычьим фибриногеном коагулазоположительные стафилококки образуют черные или серые, или ровные белые мелкие колонии, окруженные зоной преципитации, указывающей на коагулазную активность.

Бактерии рода Proteus могут вырастать и в начале инкубирования быть похожими на коагулазоположительные стафилококки, но после 24 или 48 ч инкубирования появляются стелющиеся культуры разного оттенка коричневого цвета, что позволяет отличить их от стафилококков.

На молочно-солевом агаре колонии коагулазоположительных стафилококков круглые, слегка возвышающиеся над поверхностью агара, с ровными краями, диаметром 2,,5 мм, окрашены в желтый, золотистый, лимонно-желтый, кремовый, палевый или белый цвет. На яично-желточно-азидном и яично-желточно-солевом агаре колонии коагулазоположительных стафилококков окружены зоной лецитиназной активности. Кроме типичных, коагулазоположительные стафилококки могут образовывать атипичные колонии.

Атипичные колонии на Байрд-Паркер агаре могут представлять одну из следующих морфологий: Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет. Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии.

Приложение А справочное Дифференциация коагулазоположительных видов и подвидов стафилококков по двум признакам — образованию ацетоина и ферментации мальтозы. Приложение Б справочное Сопоставление структуры настоящего стандарта со структурой. Приложение В справочное Сведения о соответствии ссылочных международных стандартов. Допускается использование хромогенных сред предварительного выявления количества коагулазоположительных стафилококков и Staphylococcus aureus в масложировой продукции.

Methods for detection and quantity determination of coagulase-positive staphylococci. Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты, кроме молока и молочных продуктов, и устанавливает методы выявления и определения количества коагулазоположительных стафилококков и Staphylococcus aureus S. Метод определения наиболее вероятного числа НВЧ коагулазоположительных стафилококков и S.

Метод определения количества коагулазоположительных стафилококков и S. В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:. Общие правила микробиологических исследований.

ГОСТ Кальций хлористый технический. Технические условия ГОСТ Приготовление растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред, применяемых в микробиологическом анализе. ГОСТ Весы лабораторные. ГОСТ Продукты пищевые и вкусовые. Методы отбора проб для микробиологических анализов. Подготовка проб для микробиологических анализов. ГОСТ Продукты пищевые. Метод определения промышленной стерильности. Если ссылочный стандарт заменен изменен , то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим измененным стандартом.

Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку. В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:. Коагулазоположительные стафилококки, образующие ацетоин и ферментирующие мальтозу в аэробных условиях при определении этих биохимических тестов по методам, приведенным в настоящем стандарте.

Определение присутствия или отсутствия коагулазоположительных стафилококков и S. Количество коагулазоположительных стафилококков или S. Метод выявления и метод НВЧ — определение количества коагулазоположительных стафилококков и S. При пересеве на агаризованную среду с кроличьей плазмой и бычьим фибриногеном выросшие типичные колонии без подтверждения по биохимическим признакам относят к коагулазоположительным стафилококкам.

Предположительное присутствие коагулазоположительных стафилококков на Жиолитти-Кантони бульоне определяется по редукции теллурита калия, а на глюкозном или солевом бульоне — по помутнению среды. Предположительное присутствие коагулазоположительных стафилококков определяется по редукции теллурита калия и яично-желточной реакции лецитиназной активности.

Подтверждение принадлежности коагулазоположительных стафилококков к S. Инкубирование посевов и подтверждение присутствия в них коагулазоположительных стафилококков и S. Методы определения количества коагулазоположительных стафилококков и S. Аналогично проводят посев десятикратных разведений испытуемого продукта. При посеве в или на агаризованную среду с кроличьей плазмой и бычьим фибриногеном определяют только типичные колонии и без подтверждения по биохимическим признакам их относят к коагулазоположительным стафилококкам.

Химические вещества, используемые для приготовления питательных сред, растворов реактивов, эмульсий, должны быть аналитического качества. При нагревании растворяют в воде все компоненты или дегидратированную основу. Разливают среду по см 3 в колбы или флаконы соответствующей вместимости.

Примечание — Необходимо предварительно убедиться, что имеющийся в наличии теллурит калия пригоден для данного испытания. Полностью растворяют теллурит калия в воде при минимальном нагревании. Твердое вещество должно легко растворяться.

Если в воде присутствует белый нерастворимый осадок, то такой порошок не используют. Стерилизуют приготовленный раствор теллурита калия путем фильтрации через мембранный фильтр с размером пор 0,22 мкм. Если при хранении раствора образуется белый осадок, то такой раствор не используют. С соблюдением правил асептики разбивают скорлупу яйца и отделяют желток от белка, поочередно перенося желток из одной половинки скорлупы в другую.

Желтки помещают в стерильную колбу и добавляют 4-кратное количество по объему стерильной воды. Для использования собирают в асептических условиях в стерильную колбу надосадочную жидкость. Допускается использование готовой эмульсии промышленного производства, в этом случае эмульсию применяют в соответствии с инструкцией изготовителя.

Допускается проводить приготовление желточной эмульсии по ГОСТ Раствор используют только в случае подозрения присутствия в испытуемом продукте бактерий рода Proteus или при испытании сильно обсемененных продуктов, например, из сырого мяса. Растворяют сульфаметазин в растворе гидроксида натрия. Доводят объем водой до см 3. Стерилизуют путем фильтрации через мембранный фильтр с размером пор 0,22 мкм. В асептических условиях добавляют два других раствора и, если необходимо, раствор сульфаметазина см.

При нагревании растворяют компоненты или дегидратированную основу среды в воде. Разливают питательную среду по 5—10 см 3 в пробирки.

Разведенную плазму по 0,5 см 3 разливают в стерильные пробирки. В плазму, содержащую оксалат или гепарин ЭДТА, не добавляется. Для приготовления агара с кроличьей плазмой и бычьим фибриногеном к плазме добавляют трипсин из расчета 30 мг трипсина на 30 см 3 плазмы. Плазму готовят непосредственно перед применением. Если используется готовая обезвоженная плазма, то восстановление и использование такой плазмы проводят в соответствии с прилагаемой к ней инструкцией. Плазма готовится непосредственно перед применением.

Качество плазмы тестируется с помощью коагулазоположительных и коагулазоотрицательных штаммов стафилококков. Лимоннокислый натрий помещают в колбу, растворяют в воде.

Следует учитывать опыт использования готовых партий добавок. Основу среды готовят по 5. С соблюдением правил асептики растворяют бычий фибриноген в воде непосредственно перед. Раствор готовят с соблюдением правил асептики, растворяют компоненты в воде непосредственно перед использованием. Особенно надо обращать внимание на температуру основы среды. При несоблюдении температуры среда может потерять свою актив. Тщательно перемешивают среду вращением после каждого прибавления, минимизируя вспенивание.

Используют готовую среду непосредственно после приготовления, тем самым избегая преципитации плазмы. При нагревании и помешивании растворяют компоненты или дегидратированную основу в воде. Разливают среду в соответствующем количестве в пробирки соответствующего объема — 16 х мм для среды нормальной концентрации и 20 х мм — для среды двойной концентрации. Голодный агар готовят по ГОСТ Наливают в пробирки соответствующего объема. Молочно-солевой агар готовят по ГОСТ Мясопептонный агар бульон готовят по ГОСТ Среду готовят по инструкции, указанной на этикетке.